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严格地说限制性内切核酸酶（restriction endonuclease）是指已被证明是（）的酶。基因工程中把那些具有识别（）的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。

通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的（）。

Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在 20~40kDa，通常由（）亚基所组成。它们的作用底物为双链 DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链 DNA，或 DNA／RNA 杂合链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有（）专一性，也具有（）的专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有（），产生（）末端的DNA片段或（）的DNA片段。作用时需要（）作辅助因子，但不需要（）和（）。

完全的回文序列具有两个基本的特点是什么？

Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别（）个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有（）倾向，即它们在识别序列中含量较高。 8．EcoK是 I类限制性内切核酸酶，分子组成是α2 β2 γ，分子量 300kDa。在这些亚基中，o 亚基具有（）作用；β亚基具有（） 的活性；γ亚基的作用则是（）。

限制性内切核酸酶 Acy I识别的序列是 5’—GRCGYG-3’，其中R（），Y（）。

I类限制酶识别 DNA 的位点和切割的 DNA位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是（），另一种是（）。

如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如 HpaⅡ和 MboI要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。

A. 正确
B. 错误

甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在 5％以下。

A. 正确
B. 错误