λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建 cDNA 文库的高效载体,这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步的遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI(5’-C十 TCGAG)进行切割,然后在 dTTP 存在的情况下,同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC,它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA,构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。假定载体长为 43kb,cDNA 的平均长度是 lkb,请估计在连接混合物中,载体分子同cDNA 的比例是多少?
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我自己叙述五十年前主张“假于鬼神时日卜筮以疑众,杀”的故事,为的是要说明我年纪越大,越觉得“容忍”比“自由”还更重要。 我到今天还是一个无神论者,我不信有一个有意志的神,我也不信灵魂不朽的说法。 我自己总觉得,这个国家、这个社会、这个世界,绝大多数人信神的,居然能有这雅量,能容忍我的无神论,能容忍我这个不信神不信灵魂不灭的人,能容忍我在国内和国外自由发表我的无神论的思想,从没有人因此用石头掷我,把我关在监狱里,或把我捆在柴堆上用火烧死。我在这个世界里居然享受了四十多年的容忍与自由。我觉得这个国家、这个社会、这个世界对我的容忍态度是可爱的,是可以感激的。 所以我自己总觉得我应该用容忍的态度来报答社会对我的容忍。所以我自己不信神,但我能诚心的谅解一切信神的人,也能诚心的容忍并且敬重一切信仰有神的宗教。 我要用容忍的态度来报答社会对我的容忍,因为我年纪越大,我越觉得容忍的重要意义。若社会没有这点容忍的气度,我决不能享受四十多年的大胆怀疑的自由,公开主张无神论的自由了。 ——选自《容忍与自由》 这段话的论点是什么?
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党政机关应当建立健全并严格执行国内差旅内部()制度,从严控制国内差旅人数和天数,严禁无明确公务目的的差旅活动,严禁以公务差旅为名变相旅游,严禁异地部门间无实质内容的学习交流和考察调研。
A. 备案
B. 预算
C. 决算
D. 审批
计算问答题:某产盐企业是增值税一般纳税人,主要生产销售液体盐和固体盐。2015年2月发生下列业务:(1)外购制盐小工具一批,取得增值税专用发票,注明价款10000元,增值税1700元,支付该项采购运费,取得运输企业(增值税一般纳税人)提供的增值税专用发票,注明不含税金额190.91元,验收入库时,因管理不善,丢失10%; (2)购入电脑一台给财务部使用,取得增值税专用发票,注明价款4000元,增值税680元; (3)自产液体盐1000吨,其中100吨直接对外销售,取得含税收入12430元;800吨移送连续生产固体盐;(4)从另一盐场(小规模纳税人)购入液体盐200吨,取得税务机关代开的增值税专用发票,价税合计21630元;将购入液体盐全部用于生产固体盐; (5)生产固体盐2000吨,当月销售1800吨,取得含税收入508500元; (6)用自产固体盐200吨换取同等含税价的生产用天然气,双方互开了增值税专用发票。(其他相关资料:假定该企业应认证的发票均得到认证并在当月进行抵扣,液体盐资源税单位税额2元/吨;固体盐资源税单位税额10元/吨) 要求:根据上述资料回答下列问题。(1)计算该企业2015年2月可抵扣的增值税进项税额; (2)计算该企业2015年2月增值税的销项税额; (3)计算该企业2015年2月应纳的增值税税额; (4)计算该企业2015年2月液体盐应纳的资源税; (5)计算该企业2015年2月固体盐应纳的资源税。