用捣碎的肌肉组织进行的早期实验表明，柠檬酸循环是需氧途径，通过此循环代谢的物质最终氧化成CO₂，而且加入循环中间物消耗的氧气比预期的多。例如，肌肉匀浆中加入1μmol的延胡索酸，消耗约25μmol的氧气，但HOOC—CH==CH—COOH(延胡索酸)+3O₂→4CO₂+2H₂O氧化反应显示，实际上只需要3μmol氧气就能完全氧化1μmol的延胡索酸。把琥珀酸、苹果酸和草酰乙酸加入肌肉匀浆液中时也有类似的现象。试解释在有足够的丙酮酸存在下，为什么这些循环中间物的加入会导致消耗的氧气比预期的多。