柱层析中，随着洗脱的进行，某种物质的洗出液浓度呈现出规律性的变化，下面表述正确的是（ ）

A. 随着洗脱的进行，洗出液离子浓度逐渐减小后又逐渐增大
B. 随着洗脱的进行，洗出液离子浓度逐渐增大，达到最大值之后又逐渐减小，至完全洗脱之后，被洗出之离子浓度又等于零
C. 随着洗脱的进行，洗出液离子浓度逐渐减小
D. 随着洗脱的进行，洗出液离子浓度不发生变化

色谱法是一组相关分离方法的总称，根据分离机理的不同，色谱法可分为__________、分配色谱法、__________ 、__________和亲和色谱法等。

简述柱色谱中湿法装柱的操作过程和注意事项

某公司技术人员需要利用凝胶过滤层析法分离纯化不同分子质量大小的蛋白质。实验过程如下：1．试剂：（1）待分离蛋白质样品混合液：含各2～3mg/ml，用氯化钾-乙酸溶液配制A牛血清清蛋白（Mr67000），B鸡卵清蛋白（Mr43000），C胰凝乳蛋白酶原A（Mr25000）和D结晶牛胰岛素（pH2时为二聚体Mr12000）。 （2）0.025mol/L氯化钾-0.2mol/L乙酸溶液（pH=2）（3）Sephadex G-50 2．器材： 层析柱：柱管（直径1.0~1.3cm；管长20~50cm），核酸蛋白检测仪或紫外分光光度计，（ ）， （ ）。3．操作方法：（1）凝胶的处理①（ ）；②（ ）。（2）（ ）：首先将柱垂直地安装好，检查层析柱（ ）。关闭层析柱出水口，并向柱管内加入约（ ）柱容积的洗脱液，然后将浓浆状的凝胶连续地倾入柱中，自然沉降，待凝胶沉降约2～3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉集，待沉集床面上升到离柱的顶端约 2~3cm处时停止装柱，关闭出水口。（3）（ ）：接着再通过 1.5～3 倍柱床容积的洗脱液（ ）使柱床稳定，平衡完成的标准：（ ）（4）（ ）：夹紧上、下进、出水口夹子，关闭恒流泵，吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切。沿管壁将样品溶液小心加到凝胶床面上，打开下口夹子，使样品溶液流入并收集流出液，当样品溶液流至与床面相切时，夹紧下口夹子。按加样操作，用1ml洗脱液冲洗管壁2次。最后加入3～4ml洗脱液于凝胶上，将进水口连洗脱瓶，层析柱出水口与 自动收集器 相连。（5）（ ）：洗脱液应与凝胶溶胀所用液体相同。洗脱时，打开上、下进出口夹子，以每管3ml/10min流速洗脱，用试管收集流出液。4．结果： 根据待分离蛋白质的分子量大小的性质[A牛血清清蛋白（Mr67000），B鸡卵清蛋白（Mr43000），C胰凝乳蛋白酶原A（Mr25000）和D结晶牛胰岛素（pH2时为二聚体Mr12000）]，分析该实验条件下蛋白质从层析柱洗脱下来的顺序（ ）。

某公司技术人员需要利用离子交换层析法分离氨基酸，实验过程如下。1.试剂与材料苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸1×8，100-200目）；无水乙醇；2mol/L盐酸溶液；2mol/LNaOH溶液；1mol/LNaOH溶液。天冬氨酸的pI为2.97，组氨酸的pI为7.59，赖氨酸的pI为9.74。标准氨基酸溶液：天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成2mg/mL的0.1mol/L的盐酸溶液。混合氨基酸溶液：将3种标准氨基酸溶液按1∶2.5∶10的比例混合。洗脱液1：0.45mol/L、pH（ ）柠檬酸缓冲液；洗脱液2：0.2 mol/L、pH（ ）Tris-HCl缓冲液；洗脱液3：0.01mol/L pH（ ） NaOH缓冲液2. 器材25cm×1cm层析管， （ ）、 （ ），分光光度计。3. 操作方法 （1）（ ）将干的强酸型树脂用蒸馏水浸泡过夜，使之充分溶胀。用4倍体积的乙醇浸泡2小时，倾去清液，洗至中性。再用2mol/L 氢氧化钠处理，做法同上；然后用2mol/L HCl溶液浸泡2小时，倾去清液，洗至中性。最后用欲使用缓冲液浸泡。（2）（ ）取直径1cm,长度25cm的层析柱。将柱垂直至于铁架上。自顶部注入上述经处理的树脂悬浮液，关闭层析柱出口，待树脂沉降后，放出过量溶液，再加入一些树脂，至树脂沉降至 距离顶端2~3cm的高度即可。（3）（ ）用pH5.8的柠檬酸缓冲液冲洗平衡交换柱。调节流速为0.5mL/min，流出液达到床体积的4倍时即（ ） 为平衡完成的标志，然后可以上样。（4）（ ）由柱上端旋转加入氨基酸的混合液0.25～0.5mL，同时开始收集流出液。当样品液面靠近床面时，即刻加入0.5mL柠檬酸缓冲液冲洗加样品处。待缓冲液面靠近床面时，再加入0.5mL缓冲液。如此重复两次，然后，将进水口连通洗脱瓶，层析柱出水口与（ ）相连。（5）洗脱用pH5.8的柠檬酸缓冲液洗脱，并用试管收集洗脱液，每管收集1mL，共收集30～40管。然后换（ ）洗脱，并用试管收集洗脱液，每管收集1mL，共收集30～40管；最后换 （ ）洗脱，并用试管收集洗脱液，每管收集1mL，共收集30～40管；4、实验结果与分析根据氨基酸的解离性质（天冬氨酸pI2.97，组氨酸pI7.59，赖氨酸pI9.74），分析该实验条件下氨基酸从层析柱洗脱下来的顺序（ ）。