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蛋白质变性的实质是什么？

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请举出三种测定蛋白质分子量的方法，并简述其原理。

凝胶过滤与SDS－PAGE都是根据分子大小对蛋白质进行分级分离的，且都使用交联聚合物作为支持介质。为什么在凝胶过滤时小分子比大分子更易滞留，而在SDS－PAGE中情况则相反？

一种分子量为24 000、pI为5．5的酶被一种分子量类似、但pI为7．0的蛋白质和另外一种分子量为100 000、pI为5．4的蛋白质污染。提出一种纯化该酶的方案。

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