逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条()链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
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()是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的()值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
在实时荧光PCR中,ct值是指每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的()。PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值的缺损设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,即:threshold = 10XSD cycle 6-15
研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的()存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出(),其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从()上计算出该样品的起始拷贝数。